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卫生资格考试微生物检验:细菌遗传物质的检测

   通过检测病原体遗传物质来确认病原体也许是检查病原体为直接的方法了。目前比较成熟的技术包括基因探针技术和PCR技术。

  (一)基因探针技术

  用标记物标记细菌染色体或质粒DNA上的特异性片段制备成细菌探针,待检标本经过短时间培养后,经过点膜、裂解变性、预杂交和杂交后,利用探针上标记物发出的信号可以知道杂交结果并判断病原体的性质。基因探针技术操作比较复杂,加之同位素污染等问题,目前尚不能普及应用。近年来发展起来的地高辛标记的非同位素探针,从探针标记到杂交都很方便,只是价格昂贵,仍限于科研应用,尚不能普及。

  (二)PCR技术

  这是八十年代末发展起来的一项极有应用价值的技术,设计病原体基因的特异引物,细菌标本(不经培养)经过简单裂解、变性后,就可在PCR仪上进行扩增反应,经过25~30个循环,通过琼脂糖电泳即可观察扩增结果,检出病原体。这种技术的特点是简便、快速。它尤其适于那些培养时间较长的病原菌的检查,如结核杆菌、支原体等。PCR高度的敏感性使该技术在病原体诊断过程中极易出现假阳性,避免污染是提高PCR诊断准确性的关键环节。

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